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kou罩微生物檢測系列產(chǎn)品，包括非無菌kou罩的細菌菌落總數(shù)檢測、大腸菌群檢測、綠膿桿菌檢測、黃金色葡萄球菌檢測、溶血性鏈球菌檢測、真菌菌落總數(shù)檢測等指標，以及無菌kou罩無菌檢查所需的檢測產(chǎn)品，依據(jù)標準分別是GB15979-2002一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準及2015版中國藥典無菌檢查法。
上周四（5月7日），美國CDC職業(yè)安全與健康研究所（NIOSH）發(fā)布的檢測發(fā)現(xiàn)，67 種不同類型的進口 N95 型kou罩中，約有 60% 未達標。美國政府還強調(diào)，6成產(chǎn)品中又以從中國進口的KN95kou罩（N95同等級）”。美國政府稱，花大價錢買了中國kou罩，反而卻讓一線醫(yī)護人員陷入更大的感染風險中。美國 FDA表示，撤回中國60多家制造商向美國出口N95的許可，將中國獲準為美國生產(chǎn)N95kou罩的制造商數(shù)量從大約80家減少到14家。
CDC發(fā)布了中國KNkou罩的抽檢結(jié)果，由CDC下屬實驗室NPPTL執(zhí)行，是CDC為非美國產(chǎn)中國的N95類型（基本都是KN95）的做的質(zhì)量抽檢。究其原因，我們認為，一是各國執(zhí)行標準不同沒有形成統(tǒng)一；二是國內(nèi)一少部分企業(yè)確實存在質(zhì)量控制不嚴，檢測不規(guī)范等問題。
我們知道，在我國醫(yī)用kou罩執(zhí)行標準中，有GB19083-2010、YY0469-2011和YY/T0969-2013。對此，需要理化指標檢測儀器、環(huán)氧乙烷殘留檢測儀器及微生物指標檢測儀器。在上述三個標準中，對于微生物指標檢測執(zhí)行GB/T15979-2002《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準》附錄B–產(chǎn)品微生物檢測方法和GB/T14233.2-2005《 醫(yī)用輸液、輸血、注射器具檢驗方法 第2部分：生物學(xué)試驗方法》第3章–無菌試驗。
微生物檢測方法如下：
產(chǎn)品采集與樣品處理
于同一批號的二個運輸包裝中至少抽取 12個蕞小銷售包裝樣品，1/4樣品用于檢測，1/4樣品用于留樣，另 1/2樣品（可就地封存）必要時用于復(fù)檢。抽樣的蕞小銷售包裝不應(yīng)有破裂，檢驗前不得啟開。
在100級凈化條件下用無菌方法打開用于檢測的至少 3個包裝，從每個包裝中取樣，準確稱取10g±1g樣品。剪碎后加人到200ml滅菌生理鹽水中，充分混勻，得到一個生理鹽水樣液。液體產(chǎn)品用原液直接做樣液。
如被檢樣品含有大量吸水樹脂材料而導(dǎo)致不能吸出足夠樣液時，稀釋液量可按每次 50ml遞增，直至能吸出足夠測試用樣液。在計算細菌菌落總數(shù)與真菌菌落總數(shù)時相應(yīng)調(diào)整稀釋度。
細菌菌落總數(shù)與初始污染菌檢測方法
本方法適用于產(chǎn)品初始污染菌與細菌菌落總數(shù)（以下統(tǒng)稱為細菌菌落總數(shù)）檢測。
操作步驟
待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液作菌落計數(shù)。共接種 5個平皿，每個平皿中加人 1ml樣液，然后用冷卻至45℃左右的熔化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基 15～20ml倒人每個平皿內(nèi)混合均勻 。待瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置 35℃±2℃培養(yǎng) 48h后，計算平板上的菌落數(shù)。
結(jié)果報告
菌落呈片狀生長的平板不宜采用；計數(shù)符合要求的平板上的菌落，按式（B1）計算結(jié)果：
X1=A×（K÷5）
式中X1—–細菌菌落總數(shù) cfu/g或cfu/mL；
A——5塊營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板上的細菌菌落總數(shù)；
K——稀釋度。
當菌落數(shù)在 100以內(nèi)，按實有數(shù)報告，大于 100時采用二位有效數(shù)字。
如果樣品菌落總數(shù)超過本標準的規(guī)定，按 B2.3進行復(fù)檢和結(jié)果報告。
復(fù)檢方法
將留存的復(fù)檢樣品依前法復(fù)測 2次，2次結(jié)果平均值都達到本標準的規(guī)定，則判定被檢樣品合格；其中有任何 1次結(jié)果平均值超過本標準規(guī)定，則判定被檢樣品不合格。
大腸菌群檢測方法
操作步驟
取樣液 5ml接種 50ml，乳糖膽鹽發(fā)酵管，置 35℃±2℃培養(yǎng) 24h，如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則報告為大腸菌群陰性。
如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則劃線接種伊紅美藍瓊脂平板，置35℃±2℃培養(yǎng) 18～24h，觀察平板上菌落形態(tài)。典型的大腸菌落為黑紫色或紅紫色，圓形，邊緣整齊，表面光滑濕潤，常具有金屬光澤，也有的呈紫黑色，不帶或略帶金屬光澤，或粉紅色，中心較深的菌落。
取疑似菌落 1-2個作革蘭氏染色鏡檢，同時接種乳糖發(fā)醉管，置 35℃±2℃培養(yǎng) 24h，觀察產(chǎn)氣情況。
結(jié)果報告
凡乳糖膽鹽發(fā)酵骨產(chǎn)酸產(chǎn)氣，乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在伊紅美藍平板上有典型大腸菌落，革蘭氏染色為陰性無芽胞桿菌，可報告被檢樣品檢出大腸桿菌。
綠膿桿菌檢測方法
操作步驟
取樣液 5ml，加人到50ml SCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置 35℃±2℃培養(yǎng) 18～24h。如有綠膿桿菌生長，培養(yǎng)液農(nóng)面呈現(xiàn)一層薄菌膜，培養(yǎng)液常呈黃綠色或藍綠色。從培養(yǎng)液的薄菌膜處挑取培養(yǎng)物，劃線接種十六烷*基溴化胺瓊脂平板，置 35℃±2℃ 培養(yǎng) 18～24h，觀察菌落特征。綠膿桿菌在此培養(yǎng)基上生長良好，菌落扁平，邊緣不整，菌落周圍培養(yǎng)基略帶粉紅色，其他菌不長。
取可疑菌落涂片作革蘭氏染色，鏡檢為革蘭氏陰性菌者應(yīng)進行下列試驗：
氧化酶試驗：取一小塊潔凈的白色濾紙片放在滅菌平皿內(nèi)，用無菌玻棒挑取可疑菌落涂在濾紙片上，然后在其上滴加一滴新配制的 1%二甲基對苯二胺試液，30s內(nèi)出現(xiàn)粉紅色或紫紅色，為氧化酶試驗陽性，不變色者為陰性。
綠膿菌素試驗：取2-3個可疑菌落，分別接種在綠膿菌素測定用培養(yǎng)基斜面，35℃±2℃培養(yǎng)24h，加人CHCl?約3～5ml，充分振蕩使培養(yǎng)物中可能存在的綠膿菌素溶解，待CHCl?呈藍色時，用吸管移到另一試管中并加人 1mol/L的鹽酸1mL，振蕩后靜置片刻。如上層出現(xiàn)粉紅色或紫紅色即為陽性，表示有綠膿菌素存在。
硝酸鹽還原產(chǎn)氣試驗：挑取被檢菌落純培養(yǎng)物接種在硝酸鹽脈水培養(yǎng)基中，置 35C12C培養(yǎng)24h培養(yǎng)基小倒管中有氣者即為陽性
明膠液化試驗：取可疑菌落純培養(yǎng)物，穿刺接種在明膠培養(yǎng)基內(nèi)，置 35℃±2℃培養(yǎng) 24h，取出放于4～10C，如仍呈液態(tài)為陽性，凝固者為陰性。
42℃生長試驗：取可疑培養(yǎng)物，接種在普通瓊脂斜面培養(yǎng)基上，置 42℃培養(yǎng) 24～48h，有綠膿桿菌生長為陽性。
結(jié)果報告
被檢樣品經(jīng)增菌分離培養(yǎng)后，證實為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿桿菌試驗均為陽性者，即可報告被檢樣品中檢出綠膿桿菌如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42℃生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。
金黃色葡萄球菌檢測方法
操作步驟
取樣液 5ml，加入到 50mL SCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置 35℃±2℃培養(yǎng) 24h，自上述增菌液中取1～2接種環(huán)，劃線接種在血瓊脂培養(yǎng)基上，置 35℃±2℃培養(yǎng)24～48h。在血瓊脂平板上該菌菌落呈金黃色，大而突起，圓形，不透明，表面光滑，周圍有溶血圈。
挑取典型菌落，涂片作革蘭氏染色鏡檢，金黃色葡萄球菌為革蘭氏陽性球菌，排列成葡萄狀，無芽胞與莢膜。鏡檢符合 上述情況，應(yīng)進行下列試驗：
甘露醇發(fā)酵試驗：取上述菌落接種甘露醇培養(yǎng)液，置 35℃±2℃培養(yǎng) 24h，發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸者為陽性。
血漿凝固酶試驗：
（1）玻片法：取清潔干燥載玻片，一端滴加一滴生理鹽水，另一端滴加一滴兔血漿，挑:取菌落分別與生理鹽水和血漿混合，5min如血漿內(nèi)出現(xiàn)團塊或顆粒狀凝塊，而鹽水滴仍呈均勻混濁無凝固則為陽性，如兩者均無凝固則為陰性。凡鹽水滴與血漿滴均有凝固現(xiàn)象，再進行試管凝固酶試驗；
（2）試管法：吸取 1：4新鮮血漿 0.5ml，放滅菌小試管中，加入等量待檢菌 24小時肉湯培養(yǎng)物 0.55mL，混勻，放 35℃±2℃溫箱或水浴中，每半小時觀察一次，24h之內(nèi)呈現(xiàn)凝塊即為陽性。同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養(yǎng)物各0.5ml，作為陽性與陰性對照。
結(jié)果報告
凡在瓊脂平板上有可疑菌落生長，鏡檢為革蘭氏陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。
溶血性鏈球菌檢測方法
操作步驟
取樣液 5ml加人到 50ml葡萄糖肉湯， 35℃±2℃培養(yǎng) 24h，將培養(yǎng)物劃線接種血瓊脂平板， 35℃±2℃培養(yǎng)24h觀察菌落特征。溶血性鏈球菌在血平板上為灰自色，半透明或不透明，針尖狀突起，表面光滑，邊緣整齊，周圍有無色透明溶血圈。
挑取典型菌落作涂片革蘭氏染色鏡檢，應(yīng)為革蘭氏陽性，呈鏈狀排列的球菌。鏡檢符合上述情況，應(yīng)進行下列試驗：
鏈激酶試驗：吸取草酸鉀血漿 0.2ml（0.01g草酸鉀加5mL兔血漿混勻，經(jīng)離心沉淀，吸取上清液），加人 0.8ml滅菌生理鹽水，混勻后再加人待檢菌 24小時肉湯培養(yǎng)物0.5ml和0.25%氯化鈣0.25ml，混勻，放 35℃±2℃水浴中，2min觀察一次（一般10min內(nèi)可凝固），待血漿凝固后繼續(xù)觀察并記錄溶化時間。如 2h內(nèi)不溶化，繼續(xù)放置 24h觀察，如凝塊全部溶化為陽性，24h仍不溶化為陰性。
桿菌膚敏感試驗：將被檢菌菌液涂于血平板上，用滅菌鑷子取每片含 0.04單位桿菌膚的紙片放在平板表面仁，同時以已知陽性菌株作對照，在 35℃±2℃下放置 18～24h，有抑菌帶者為陽性。
結(jié)果報告
鏡檢革蘭氏陽性鏈狀排列球菌，血平板上呈現(xiàn)溶血圈，鏈激酶和桿菌膚試驗陽性，可報告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。
真菌菌落總數(shù)檢測方法
操作步驟
待上述生理鹽水樣液自然沉降后取上清液作真菌計數(shù)。共接種5個平皿，每個平皿中加人 1ml樣液，然后用冷卻至 45℃左右的熔化的沙氏瓊脂培養(yǎng)基 15 ～25mL倒人每個平皿內(nèi)混合均勻，瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平皿置 25℃±2℃培養(yǎng) 7天，分別于 3、5、7天觀察，計算平板上的菌落數(shù)，如果發(fā)現(xiàn)菌落蔓延，以前 一次的菌落計數(shù)為準。
結(jié)果報告
菌落呈片狀生長的平板不宜采用；計數(shù)符合要求的平板上的菌落，按式（B2）計算結(jié)果：
X2=B×（K÷5）
式中X2—–真菌菌落總數(shù)，cfu/g或cfu/mL；
B—–5塊沙氏瓊脂培養(yǎng)基平板上的真菌菌落總數(shù);
K—–稀釋度。
當菌落數(shù)在 100以內(nèi)，按實有數(shù)報告，大于 100時采用二位有效數(shù)字。
如果樣品菌落總數(shù)超過本標準的規(guī)定，按 B7.3進行復(fù)檢和結(jié)果報告。
復(fù)檢方法
將留存的復(fù)檢樣品依前法復(fù)測 2次，2次結(jié)果都達到本標準的規(guī)定，則判定被檢樣品合格；其中有任何 1次結(jié)果超過本標準規(guī)定，則判定被檢樣品不合格。
真菌定性檢測方法
操作步驟
取樣液 5mL加入到50mL沙氏培養(yǎng)基中， 25℃±2℃培養(yǎng) 7天，逐日觀察有無真菌生長。
結(jié)果報告
培養(yǎng)管混濁應(yīng)轉(zhuǎn)種沙氏瓊脂培養(yǎng)基，證實有真菌生長，可報告被檢樣品檢出真菌。
山東德瑞克提供kou罩、微生物整套檢測儀器
